香精與香料(169)—山梅花

山梅花（學(xué)名：Philadelphus incanus），為虎耳草科山梅花屬下的一個(gè)植物種。

虎耳草科(Saxifragaceae)山梅花屬(Philadelphus)植物在全世界約有75種，我國(guó)有18種及12個(gè)變種或變型，西南、長(zhǎng)江流域至東北部均有分布。山梅花屬植物屬落葉灌木，多生在陽(yáng)坡山地的灌木叢中，通常在5 - 6月開(kāi)花，花瓣4或5瓣，形狀酷似梅花，故得其名。山梅花屬植物是民間廣為應(yīng)用的一種中草藥。山梅花根皮具有解熱鎮(zhèn)痛作用，用于治療瘧疾、痔瘡、挫傷、腰脅疼痛、胃痛、頭痛等病癥；其莖、葉入藥用于治療膀胱炎、黃疸型肝炎；花的浸劑可作為利尿劑，并可增強(qiáng)神經(jīng)系統(tǒng)功能。

山梅花的化學(xué)成分研究進(jìn)展

山梅花屬植物中已發(fā)現(xiàn)的化學(xué)成分主要有萜類(lèi)、脂肪酸衍生物、苯型化合物等揮發(fā)性成分以及糖類(lèi)、黃酮、香豆素、香蘭素、烴類(lèi)、肽類(lèi)等。

山梅花屬植物中的部分化學(xué)成分

1、揮發(fā)性成分

山梅花屬植物具有獨(dú)特的清香氣味。Andersson S等對(duì)西洋山梅花(Philadelphus coronarius)花的芳香性化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)P. coronarius花含有脂肪酸衍生物、單萜、苯型化合物及含氮化合物等28種揮發(fā)性化學(xué)成分。脂肪酸衍生物的含量為32.4%，12種脂肪酸衍生物中2-壬酮的含量最高(16.0%)；6種單萜類(lèi)化合物，含量約為47.9%，其中6-乙烯基-四氫-2,2,6-三甲基一2H-吡喃-3 (4H) -酮的含量最高(22.2%)，單萜中含有痕量(少于0.05%)沉香醇(linalool)及其呋喃型、吡喃型衍生物；苯型化合物有6種，含量約為4.5%；含4種氮化合物，含量為15.1%。從上述數(shù)據(jù)可以看出，P. coronarius花中單萜類(lèi)化合物的含量最高，其次為脂肪酸衍生物。此研究還發(fā)現(xiàn)P. coronarius花的芳香性氣味是由脂肪酸衍生物引起的。另?yè)?jù)報(bào)道，P. coronarius花的甜香味是由2-氨基苯甲醛引起的。

2、糖

在自然界，糖及其衍生物分布很廣。Southwick EE等研究雜交品種大花山梅花(P. grandiflorus)花蜜的化學(xué)成分，發(fā)現(xiàn)含有果糖、葡萄糖、蔗糖，其中葡萄糖的含量最高，其次是蔗糖，三種糖的比例為1:1.2:1.1。另?yè)?jù)報(bào)道，山梅花屬植物的葉中含有以聚合態(tài)存在的己胺糖，含量約為1.9 μg/mg蛋白，己胺糖可能是細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的基本成分。Bohm BA等在路易斯山梅花(P. lewisii)的花和葉中也發(fā)現(xiàn)了糖類(lèi)化合物。

3、黃酮

由于黃酮類(lèi)化合物具有顯著的藥理活性(如抗腫瘤、抗病毒、降血脂、抗自由基等)，因此受到人們的重視。黃酮類(lèi)化合物在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。Bohm BA等對(duì)P. lewisii花和葉的混合物粉末進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其主要含有黃酮醇及黃烷酮苷類(lèi)化合物。黃酮醇以單苷、二苷及三苷形式存在，其中三苷類(lèi)化合物含量較少。黃烷酮類(lèi)化合物除了柚皮素單苷(naringenin monoglycoside)外，還有圣草酚7-O-葡糖苷(eriodictyol 7-O-glucoside)。P. coronarius除含有上述黃酮類(lèi)化合物外，還含有其他黃酮苷類(lèi)化合物。Grancai D等采用比色法進(jìn)行檢測(cè)，P.coronarius枝和葉中黃酮類(lèi)化合物的含量分別為0.63%和0.01%。山梅花屬植物中的黃酮類(lèi)化合物見(jiàn)下表。

山梅花屬植物中存在的黃酮類(lèi)化合物

4、香蘭素

香蘭素(vanillin)，又名香草醛，在自然界中廣泛存在，被譽(yù)為“食品香料之王”，被廣泛用于食品、日用化工、煙草工業(yè)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等行業(yè)，是一類(lèi)比較重要的化合物。香蘭素按結(jié)構(gòu)可分為甲氧基香蘭素和乙氧基香蘭素。東北山梅花(P.schrenkii)i根中含有甲氧基香蘭素即3-甲氧基-4-羥基苯甲醛。

5、香豆素

香豆素(學(xué)名鄰羥基肉桂酸內(nèi)酯)是一種具有特殊香味的晶體，為重要的香料及化工產(chǎn)品。香豆素類(lèi)化合物具有香豆素的基本結(jié)構(gòu)，有抗菌、驅(qū)蟲(chóng)、止痛、降壓、平喘、抗氧化、抗艾滋病、抗腫瘤等多種生物活性。除此之外，香豆素類(lèi)化合物還是很好的熒光材料、激光染料和非線(xiàn)型光學(xué)材料，在分子器件方面具有獨(dú)特的性能。

Mucaji P等從P. coronarius葉的氯仿提取物中分離得到傘形酮7-羥基香豆素(umbelliferone)和莨菪亭(scopolin)。P. schrenkii根中含有7-羥基-8-甲氧基香豆素(hydrangetin)。

6、萜類(lèi)

萜類(lèi)為異戊二烯首尾相連的聚合體，有些萜類(lèi)化合物具有生理活性，如具有抗菌作用的穿心蓮內(nèi)酯，驅(qū)蟲(chóng)作用的山道年等。Mucaji P等從P. coronarius葉的石油醚提取物中分離得到3-β-28-羥基齊墩果烷-11(12),13 (18)-二烯，從氯仿提取物中得到豆甾-3-β-D-葡糖苷。

7、肽類(lèi)

P. coronarius葉中含有Y-谷氨酰肽類(lèi)化合物，如γ-L-谷氨?；?L-2-氨基-3-亞甲基戊烯酸和γ-L-谷氨酰基-2-氨基-3-亞甲基-4-戊烯酸。

8、微量元素

山梅花屬植物干燥的葉和花中含有氮、磷、鉀、鈣等微量元素。這些元素的含量與植物的生長(zhǎng)年限、土壤、營(yíng)養(yǎng)情況等因素有關(guān)。

9、其他

P. coronarius枝及葉中除含有上述化學(xué)成分外，還含有酚類(lèi)化合物。Grancai D等對(duì)P. coronarius枝及葉進(jìn)行檢測(cè)，其酚類(lèi)化合物的含量分別為3.25%和0.70%。此外，P. coronarius葉中還含有山楂醇、鏈烷烴類(lèi)化合物二十九烷(C29H60)、2-氨基-3-亞甲基-4-戊烯酸。

山梅花的生物活性研究

1 抗自由基

Klecakova J等對(duì)P. coronarius花瓣的生物活性進(jìn)行體外研究顯示，P. coronarius的花瓣具有抗自由基活性。

2抗菌活性

Jantova S等對(duì)小葉山梅花(P.microphyllus)和P.coronarius的抗菌活性進(jìn)行研究，結(jié)果表明這兩種植物的枝、葉提取物均具有明顯的抗菌活性，抑菌率約為41.8%。

山梅花屬植物的應(yīng)用

《浙江天目山藥植志》記載山梅花根皮八錢(qián)，同狗肉燉熟，調(diào)白糖服，治瘧疾、挫傷、腰脅疼痛、胃痛;山梅花根皮加白糖搗爛，貼敷患處，治頭痛。據(jù)《云南中藥資源名錄》記載，山梅花別名毛葉木通，其莖葉甘、平、淡，具有清熱利濕、消炎等作用，主治膀胱炎、黃疸型肝炎。

山梅花屬植物除具有藥用價(jià)值外，還是很好的觀賞植物。山梅花屬植物喜光、耐旱、耐寒，且耐瘠薄，具有生長(zhǎng)快、易于種植的特點(diǎn)。該屬植物樹(shù)形美觀，花期長(zhǎng)，花白色秀麗，芳香沁人，可孤植、叢植于庭園或公園中，又可植于路口、建筑物附近，是理想的庭園綠化和蜜源植物，適于在全國(guó)推廣栽培。

山梅花屬植物在我國(guó)分布廣泛，種類(lèi)繁多，其根、莖、葉及花均可入藥，可治療多種疾病，而且原料來(lái)源廣泛，廉價(jià)易得；作為觀賞植物花香四溢，令人心曠神怡，是值得大力推廣的多用途藥用植物。從國(guó)內(nèi)外對(duì)該屬植物的研究報(bào)道來(lái)看，該屬植物化學(xué)成分很有特色，但研究并不充分，特別是有關(guān)藥理作用研究的報(bào)道甚少，缺少進(jìn)一步應(yīng)用該屬植物的理論依據(jù)。因此，建議加大對(duì)該屬植物化學(xué)成分研究及活性成分篩選的力度，以發(fā)現(xiàn)該屬植物的新用途，使中藥更好地造福人類(lèi)。

山梅花的藥理活性

1、歐洲山梅花葉、枝水提物的細(xì)胞毒性研究

歐洲山梅花(Philadelphus coronarius L.)是一種高大、長(zhǎng)莖、落葉的老式灌木，以在晚春開(kāi)出芳香的白花而聞名。Philadelphus L.屬的一些成員以其抗菌，抗自由基和免疫調(diào)節(jié)作用而聞名。因此，這些草本植物是分離活性物質(zhì)的理想來(lái)源。Valko等研究了繡球科歐洲山梅花(Philadelphus coronarius L.)葉、枝水提物的細(xì)胞毒性作用。A431細(xì)胞(人皮膚癌細(xì)胞系)和人乳腺癌細(xì)胞系(MCF-7)分別用不同劑量的單個(gè)提取物(0,1-100微克干物質(zhì)/ml)處理24 h和72 h，無(wú)論處理時(shí)間如何，兩種植物部位提取物對(duì)MCF-7細(xì)胞的毒性均最高。A431細(xì)胞對(duì)葉片和枝葉提取物的毒性反應(yīng)不敏感，但存在時(shí)間依賴(lài)性，慢性治療后毒性有加重的趨勢(shì)。枝葉提取物的毒性作用程度無(wú)顯著差異。研究結(jié)果為今后從這些提取物中分離活性物質(zhì)的研究提供了基礎(chǔ)。

與A431細(xì)胞相比，MCF-7細(xì)胞更容易受到較低劑量的山梅花樹(shù)枝和樹(shù)葉提取物的毒性作用。山梅花葉片提取物對(duì)MCF-7的急性和慢性處理效果相同，而山梅花樹(shù)枝提取物對(duì)MCF-7的減弱細(xì)胞反應(yīng)72 h。兩種提取物處理對(duì)A431細(xì)胞的毒性作用程度相似，對(duì)山梅花葉提取物的慢性暴露敏感性增加。

結(jié)果表明，山梅花枝葉水提物具有劑量依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性的細(xì)胞毒作用。這些效應(yīng)的特征取決于植物的部位、暴露時(shí)間和被測(cè)細(xì)胞系。根據(jù)ED50值，MCF-7細(xì)胞對(duì)MTT法測(cè)定的毒性作用比A431細(xì)胞更敏感。慢性暴露于樹(shù)枝提取物的MCF-7降低了反應(yīng)性，這可能表明存在適應(yīng)機(jī)制。與此相反，A431細(xì)胞對(duì)山梅花葉片和樹(shù)枝提取物的毒性作用越敏感。

我們認(rèn)為山梅花枝葉提取物的不同毒副作用是由于其活性物質(zhì)含量和相對(duì)組成不同所致。之前的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)甚至對(duì)植物不同部位不同物質(zhì)的含量進(jìn)行了描述，支持了這一假設(shè)。這項(xiàng)工作將通過(guò)研究單個(gè)活性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞增殖的影響和細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的機(jī)制繼續(xù)進(jìn)行。

2、凍干山梅花葉、花外用劑型:植物的抗菌、抗氧化和抗炎評(píng)價(jià)

山梅花是一種多功能植物，它在民間醫(yī)學(xué)中的使用有著悠久的傳統(tǒng)；然而，從科學(xué)上講，中草藥的醫(yī)學(xué)利用是一個(gè)探索較少的研究領(lǐng)域。我們研究的目的是確定葉和花的生物活性化合物的數(shù)量，并準(zhǔn)備他們的凍干產(chǎn)品，從醫(yī)療軟膏配方，因?yàn)樯矫坊ǖ耐獠繎?yīng)用也沒(méi)有被研究。對(duì)其進(jìn)行體外釋藥、結(jié)構(gòu)分析和生物相容性實(shí)驗(yàn)，以及微生物學(xué)、抗氧化和抗炎性能的研究。結(jié)果表明，制劑的組成和輔料的選擇對(duì)制劑的藥物釋放度、質(zhì)地和生物利用度有較大的影響。在微生物學(xué)試驗(yàn)中，山梅花葉片對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有明顯的抑制作用，但在HaCaT細(xì)胞上對(duì)IL-4的產(chǎn)生沒(méi)有明顯的抑制作用。山梅花是一種很有前途的草本植物，其局部外用于抗菌治療可作為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療的有益補(bǔ)充。

由于文獻(xiàn)中對(duì)山梅花(Philadelphus coronarius L.)的研究較少，本文對(duì)該植物進(jìn)行了特征分析和研究。然而，許多有益的藥物作用，如抗炎和抗菌活性是從在傳統(tǒng)應(yīng)用中注意到的。利用該植物的葉和花為原料，研制了該植物提取物的凍干產(chǎn)品。此外，通過(guò)不同的方法評(píng)估抗氧化能力，并與草藥組成外用劑型。

本課題的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

在天然制劑中，具有良好特征的活性物質(zhì)含量、穩(wěn)定性和易加工性是關(guān)鍵。為此，制備了一種凍干產(chǎn)品。在這種形式下，有效成分是穩(wěn)定的，易于加工。從科學(xué)文獻(xiàn)來(lái)看，凍干產(chǎn)品的制備方法是獨(dú)特的，因?yàn)榇蠖鄶?shù)研究只研究了山梅花的提取物，其中仍然含有乙醇、甲醇等有機(jī)溶劑，可能會(huì)影響安全性，導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)論。

作為研究的一部分，我們測(cè)定了山梅花葉和花的抗氧化活性，以及總多酚和總黃酮含量。多酚是重要的代謝物和強(qiáng)抗氧化劑，能夠防止紫外線(xiàn)輻射和減少炎癥。類(lèi)黃酮作為抗菌劑和抗氧化劑，它們也有抗炎作用。ABTS和Cuprac檢測(cè)結(jié)果顯示花具有較好的抗氧化能力;DPPH法與FRAP法無(wú)顯著差異。只有ABTS和Cuprac測(cè)定結(jié)果在葉片和花中存在顯著差異，其主要原因可能是花中檢測(cè)到的活性成分多于葉片。沒(méi)食子酸和槲皮素是兩種知名的有效抗氧化化合物;它們能防止氧化應(yīng)激。這兩種化合物只在花中發(fā)現(xiàn)，這解釋了花為什么具有更好的抗氧化能力。不同的抗氧化活性測(cè)定方法是基于不同的機(jī)制，敏感性也不同，這就解釋了不同方法對(duì)葉片和花的抗氧化能力測(cè)定結(jié)果差異不顯著的原因。這就是為什么建議用不同的方法來(lái)測(cè)試抗氧化能力。

山梅花的花、葉體外殺傷試驗(yàn)。與對(duì)照相比，花對(duì)細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)沒(méi)有抑制或延緩作用，而葉對(duì)白色念珠菌和金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)有延緩作用。

根據(jù)科學(xué)文獻(xiàn)，山梅花具有抗菌特性。以前也曾用微量稀釋法對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌進(jìn)行過(guò)研究。與本研究的其他草本提取物相比，證實(shí)該提取物具有較強(qiáng)的抗菌作用。在我們的系列實(shí)驗(yàn)中，研究了凍干花和葉的抗菌性能，并進(jìn)行了抗真菌的研究。首先進(jìn)行微量稀釋。結(jié)果表明，山梅花的花瓣降低了大腸桿菌的活性，而山梅花葉降低了金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的細(xì)胞活性。為了獲得本課題的進(jìn)一步信息，我們繼續(xù)進(jìn)行了體外殺菌的時(shí)效試驗(yàn)，研究了山梅花隨時(shí)間推移對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響。金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的生長(zhǎng)受到山梅花葉片的影響，而花沒(méi)有引起任何變化。然而，這些結(jié)果與微量稀釋的結(jié)果不一致，因?yàn)楹苊黠@，葉片具有抗菌潛力。時(shí)間間隔測(cè)試被認(rèn)為是兩種方法中更準(zhǔn)確的，因?yàn)樗鼘r(shí)間作為實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)重要因素。

將山梅花葉和花的提取物分別置于先前發(fā)炎的HaCaT細(xì)胞上檢測(cè)。結(jié)果表明，盡管繡球花科植物山梅花的抗炎作用在過(guò)去已經(jīng)被評(píng)估過(guò)，但花提取物預(yù)處理并沒(méi)有顯著降低IL-4水平。Dilshara等人研究了大葉金絲桃葉提取物是否具有抗炎作用。我們觀察到，提取物可以抑制一些促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，如NO、PGE2和TNFα。此外，Nakamura等研究發(fā)現(xiàn)，大葉金針花可降低IL-6的mRNS表達(dá)。

IL-4 ELISA檢測(cè)結(jié)果。數(shù)據(jù)為6孔的平均值±SD。用山梅花的葉(5%)和花(3%和5%)預(yù)處理HaCaT細(xì)胞沒(méi)有顯著降低IL-4的產(chǎn)生。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;n = 5。組間比較采用普通單因素方差分析。

精心挑選的輔料可能會(huì)影響外用制劑的許多特性，通常它們還可以通過(guò)增加生物利用度來(lái)支持藥物效果。在確定藥膏成分時(shí)，選擇輔料，以獲得最佳的有效成分的潛在生物利用度。根據(jù)Csizmazia等人的研究，蔗糖酯(如SP70)能夠增強(qiáng)活性物質(zhì)(如布洛芬)的穿透性和效果。這同樣適用于Tefose 63;在Abd-Elsalam等人的研究中，Tefose 63提高了伏立康唑的生物利用度和效果。我們的體外釋放研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。CMP 2效果最好，CMP 1、4、5次之。釋放率最低的是CMP 3和6。這些結(jié)果表明，以Tefose 63或SP70作為表面活性劑的處方最終具有更好的釋放特性，這可能導(dǎo)致活性藥物成分更好的生物利用度。

不同o/w軟膏成分的釋放概況。CMP 4的持續(xù)擴(kuò)散曲線(xiàn)最好，其次是CMP 2和CMP 5, CMP 3和CMP 6的持續(xù)擴(kuò)散曲線(xiàn)更好。結(jié)果為6個(gè)樣本的平均值±SD。

然而，表面活性劑和滲透增強(qiáng)劑的應(yīng)用可能極大地影響不同外用制劑的生物相容性。細(xì)胞相容性是最低要求。必須強(qiáng)制檢查每種情況下制劑的安全性。在我們的實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)行了iso標(biāo)準(zhǔn)的MTT測(cè)試。結(jié)果表明，山梅花葉、山梅花花及膏體成分安全無(wú)毒。在每一種情況下，細(xì)胞活力值都超過(guò)70%，符合ISO 10993-5的建議。

在藥品和化妝品的情況下，患者的依從性是一個(gè)重要的因素。準(zhǔn)備工作必須盡可能耐心友好，盡量減少或避免不方便。對(duì)于軟膏，質(zhì)地可能是研究依從性的一部分，因此進(jìn)行了質(zhì)地分析。為此，我們選擇了o/w型乳狀軟膏作為劑型，因?yàn)樗某矶容^輕，很受患者的歡迎。質(zhì)地分析顯示CMP 2和CMP 5的粘稠度最高(均含有tedefos 63)， CMP 3和CMP 6的粘稠度最低(均含有Sedefos 75)，但所有成分都易于涂抹和涂抹。

質(zhì)地分析結(jié)果。不同表面活性劑對(duì)不同軟膏的耐藥性能的影響。CMP 2和5的一致性最差，CMP 3和6的一致性最差。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;n = 5。采用普通單因素方差分析對(duì)制劑進(jìn)行比較。圖中以星號(hào)表示顯著差異。*表示p < 0.05有顯著差異。

目前的研究為研究人員提供了山梅花新的和有用的信息，該植物是一種化學(xué)和治療性質(zhì)廣泛但科學(xué)研究較少的植物。在實(shí)驗(yàn)中，利用花和葉研究了一些草藥的假定作用。化學(xué)化合物的鑒定和有效藥物成分的確切數(shù)量的確定增加了目前關(guān)于植物的知識(shí)。將凍干后的產(chǎn)品加入到制劑中配制膏劑。這提高了應(yīng)用草藥局部考慮的抗菌潛力山梅花的可能性。

制備的軟膏組合物(a)的體外細(xì)胞毒性;不同濃度山梅花葉和花的體外細(xì)胞毒性(b)。以PBS的百分比計(jì)算細(xì)胞活力。所有樣品都是安全的;細(xì)胞存活率均在80%以上。數(shù)據(jù)為6孔的平均值±SD。采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。顯著差異用星號(hào)表示。****表示p小于0.0001，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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